Разработанная нами технология позволяет проводить эффективную очистку лактоферина животного происхождения и получать продукт с высокой степенью чистоты. Источником для получения лактоферина является коровье молоко.
Основным методом получения лактоферрина является ионообменная хроматография. Поскольку лактоферрин является основным белком, он сорбируется при нейтральном рН на сорбентах-катионообменниках в отличие от большинства других белков молока. Наряду с электрофоретической гомогенностью, важнейшим критерием качества лактоферрина является содержание в нем липополисахарида (ЛПС), или эндотоксина. ЛПС — это фрагменты клеточной стенки грам-отрицательных бактерий. Показано, что ЛПС даже в очень низких концентрациях воздействуют на организм животных и человека вызывая патофизиологические процессы, приводящие к шоку, повреждению клеточных тканей и даже смерти.
Удаление ЛПС из коммерческих препаратов белков является весьма сложной задачей, для решения которой существует ряд известных методов: ионообменная хроматография, аффинная хроматография с использованием L-гистидина, поли-L-лизина, поли-(ɣ-метил-L-глутамата), полиэтиленимина и полимиксина Важно также иметь в виду, что ЛПС, как правило, образуют с белками прочные комплексы, которые приходится разрушать для удаления ЛПС.
Исходный препарат Лактоферрина (сырьё) с низкой степенью очистки мы анализировали с использованием ВЭЖХ и электрофорезом в 10%-ном ПААГ. Электрофорез с использованием стандартных растворов лактоферрина показал, что исходный препарат, используемый нами для последующей очистки имеет такую же электрофоретическую подвижность, что и стандартные образцы лактоферрина.
Для количественной и качественной оценки лактоферрина как в исходных (сырьё) образцах, так и в очищенных образцах нами была использована высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).
ВЭЖХ-анализ полученного по нашей технологии конечного продукта показал, что дополнительные белковые примеси исчезли и лактоферрин является гомогенным. Полученный нами после лиофильной сушки лактоферрин представляет собой по цвету белый или слабо окрашенный порошок. Нами разработана и подготовлена для промышленного применения уникальная технология очистки лактоферрина от примесных белков и липополисахаридов (ЛПС).